SARS-CoV-2- & Influenza A/B-PCR (POCT)

SARS-CoV-2- & Influenza-PCR

Themenübersicht

Allgemeines

  • Bei der SARS-CoV-2 & Influenza A/B-PCR (Polymerase-Kettenreaktion) zur Verwendung auf einem POCT-Gerät handelt es sich um einen automatisierten Echtzeit-RT-PCR-Multiplex-Test für den schnellen qualitativen In-vitro-Nachweis und die gleichzeitige Differenzierung von SARS-CoV-2-, Influenza-A- und Influenza-B-Virus-RNA in von medizinischem Fachpersonal entnommenen Nasopharyngeal- und Nasalabstrichen und in vom Patienten selbst (vor Ort und unter Anleitung einer qualifizierten Fachkraft) entnommenen Nasalabstrichen von Patienten mit Anzeichen einer viralen Atemwegsinfektion mit COVID-19-typischen Symptomen durch eine medizinische Einrichtung.

Indikation

Differenzialdiagnose von COVID-19 und Influenza

Material

Universalabstrich

  • Die Probe mit einem sterilen beflockten Tupfer mit Kunststoffstiel (z. B. Dacron, Nylon oder Viskose) gemäß den Anweisungen des Herstellers und/oder nach dem Standardverfahren unter Verwendung von 3 ml Virustransport-medium entnehmen.
  • keine Baumwoll- oder Calciumalginat-Tupfer, eSwab-Tupfer oder Tupfer mit Holzstielen verwenden.
Stabilität
20-25 °C
4 Stunden (auch im Assay Tube)
2-8 °C
72 Stunden
-70°C
länger

Durchführung

Durchführungsort/-orte:

MZLA - Standort Zeitz
MZLA - Standort Naumburg
MZLA - Standort Delitzsch
MZLA - Standort Altenburg
Durchführungsfrequenz
werktags
jederzeit
an anderen Tagen
jederzeit

Referenzbereich

nicht nachweisbar

Beurteilung der Ergebnisse

Meldepflicht:

Bei positivem Nachweis erfolgt eine namentliche Meldung an das Gesundheitsamt, sofern der direkte oder indirekte Nachweis auf eine akute Infektion hinweist.

  • Sowohl der direkte Nachweis von SARS-CoV-2 als auch der von Influenza A/B ist namentlich meldepflichtig.

Testprinzipien:

  • Zielsequenz:
    • SARS-CoV-2: im ORF1 a/b- und im Nukleokapsidprotein-Gen
    • Influenza A: in der hoch konservierten Region des Matrixgens
    • Influenza B: in der hoch konservierten Region des Nicht-Strukturprotein-Gens
  • Inzwischen haben zahlreiche Studien gezeigt, dass ein positiver SARS-CoV-2-Nachweis nicht zwingend mit Infektiosität gleichgesetzt werden sollte. Je nach Ausprägung und Schwere der Erkrankung gelingt der Virusnachweis über mehrere Wochen. Als Hilfe für die Einschätzung der Infektiosität wurde der Verlust der Virus-Anzüchtbarkeit in Zellkultur einbezogen.

Entisolation (LINK: RKI/Coronavirus-Entlassmanagement):

  • Zusätzlich zu den zeitlichen und klinischen Kriterien ist zur Entisolierung bei schwerem Verlauf und bei Bewohnern von Altenpflegeeinrichtungen ein aussagekräftiger PCR-Befund erforderlich. Geeignet sind:
        • Ein negativer PCR-Befund aus dem oberen Respirationstrakt (Ergebnis aus zwei zeitgleich durchgeführten Abstrichen)
        • bzw. alternativ (insbesondere nach Aufenthalt auf einer Intensivstation/Beatmung) Ergebnisse aus einer PCR-Analyse unterhalb eines definierten Schwellenwertes, der eine Aussage über die Anzuchtwahrscheinlichkeit erlaubt (quantitative Bezugsprobe Zellkulturüberstand < 10E6 Kopien/ml)

Dauer der PCR-Positivität (Quelle: RKI):

 

Grenzen des Verfahrens

  • Negative Ergebnisse schließen, wie bei anderen Tests auch, eine SARS-CoV-2-, Influenza A- oder Influenza B-Virus-infektion nicht aus und dürfen nicht als alleinige Grundlage für die Behandlung oder andere Entscheidungen bezüglich der Versorgung des Patienten herangezogen werden.
  • Falsch-negative Ergebnisse können auftreten, wenn eine Probe nicht fachgerecht entnommen, transportiert oder gehandhabt wird, wenn zu wenig nachweisbare RNA vorhanden ist oder wenn mindestens ein Zielvirus die Amplifikation anderer Zielsequenzen hemmt.
  • Es kann zu ungültigen Ergebnissen kommen, wenn zu wenig Probe vorhanden ist oder die Probe hemmende Substanzen enthält, die die Isolierung und/oder Amplifikation und Detektion der Ziel-Nukleinsäuren verhindern.
  • Mutationen in den Zielregionen, die durch den SARS-CoV-2 & Influenza A/B-Test abgedeckt werden, können die Primer- und/oder Sondenbindung beeinträchtigen und dadurch zur Nichterkennung des Virus führen.

Analytische Sensitivität:

  • Nachweisgrenze (Trefferquote von 95%):
    • SARS-CoV-2
      • 0.012 TCID50/ml
      • 12 Kopien/ml
    • Influenza A/B
      • 0.002-0.02 TCID50/ml

Weiterführende Untersuchungen

Literatur

  • Herstellerangaben
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